Дендритные клетки в лечении впч

Вирусные инфекции кожи и слизистых оболочек составляют одну из наиболее широко распространенных групп дерматологических заболеваний. Чаще всего эти заболевания вызывают вирусы простого герпеса и папилломы человека. Для герпеса и папилломатоза характерны хроническое течение и пожизненное вирусоносительство. Способность к неограниченно долгому персистированию в организме больного обусловлена особенностями жизненной стратегии этих вирусов, основанной на блокировании механизмов врожденного и адаптивного антивирусного иммунитета. Используя различные приемы молекулярной мимикрии, подавления активности иммунокомпетентных клеток, вирусы, как стало известно в последние годы на примере представителей семейства Herpesviridae, обеспечивают защиту зараженных ими эпителиальных клеток от уничтожения Т-лимфоцитами и естественными киллерами, беспрепятственную репликацию вирусного генома и инфицирование новых клеток-хозяев. Иммунная система здорового человека ограничивает вирусную экспансию, однако в большинстве случаев неспособна элиминировать скрытую вирусную инфекцию. Даже небольшие сбои в системе иммунологического надзора приводят к рецидивированию заболевания, а стойкое состояние иммунодефицита может сопровождаться развитием острой вирусной инфекции, поражением жизненно важных внутренних органов и летальным исходом. Особую опасность представляют онкогенные типы вируса папилломы человека, связь которых с развитием рака шейки матки и других органов хорошо известна [1].

Не вызывает сомнения, что поддержание системы антивирусного иммунитета на необходимом уровне является ключом к сохранению здорового состояния кожи в условиях повсеместного и практически неконтролируемого распространения вирусов герпеса и папилломы. Вопрос состоит в том, как достичь этой цели при помощи доступных дерматологических средств. В этой связи следует вспомнить, что кожа сама является важнейшим органом иммунной системы. Кератиноциты, дендритные клетки, эпидермальные лимфоциты играют решающую роль в первичных иммунологических реакциях, направленных на распознавание и уничтожение патогенов и инфицированных ими клеток, презентацию антигенов и последующее формирование специфического иммунитета [2]. Сказанное в еще большей степени справедливо в отношении слизистых оболочек, служащих главными воротами для проникновения различных инфекционных агентов.

Существует большое разнообразие фармакологических и дермато-косметологических средств, предназначенных для защиты кожи и слизистых оболочек от вирусов. Однако опыт практической медицины в области терапии герпесвирусных и папилломавирусных инфекций показывает, что эта проблема пока еще далека от своего разрешения. В задачу настоящей статьи входит ознакомление врачей, сталкивающихся в своей практической деятельности с трудностями терапии герпеса и папиллом различной локализации, с новым подходом, основанным на применении аллоферонов.

Аллофероны — новая группа антивирусных препаратов природного происхождения. Первоначально это семейство биологически активных пептидов было выделено из клеток иммунной системы «хирургических личинок» — насекомых семейства Calliphoridae [3]. В те времена, когда медицина еще не знала антибиотиков, хирургические личинки и продукты их жизнедеятельности широко использовались для лечения инфицированных ран. Как показали исследования последних лет, иммунная система этих насекомых синтезирует ряд мощных антимикробных факторов и содержит клетки, функционально сходные с естественными киллерами млекопитающих [4]. В настоящее время аллофероны производятся путем химического синтеза, что позволяет вводить их в состав современных лекарственных и косметических средств.

На основе аллоферона-1 разработана инъекционная лекарственная форма, которая выпускается под названием “Аллокин-альфа” и предназначена для лечения рецидивирующего генитального герпеса и гепатита В (Федеральное руководство по использованию лекарственных средств, выпуск V, Москва, 2004, раздел 20.1.2.2.3.2). Аллокин-альфа прошел всесторонние клинические исследования в Институте эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи РАМН, Институте иммунологии МЗ РФ, Институте вирусологии РАМН, Московской медицинской академии им. Сеченова, Центральном научно-исследовательском кожно-венерологическом институте МЗ РФ. В частности, Аллокин-альфа продемонстрировал высокую терапевтическую эффективность при лечении рецидивов хронического генитального герпеса [5]. По сравнению с ацикловиром, Аллокин-альфа значительно быстрее устранял герпетические высыпания и, что особенно важно, обеспечивал увеличение периода ремиссии. Изучение иммунного статуса пациентов, принявших участие в клинических испытаниях, подтвердило, что механизм терапевтического действия аллокина-альфа включает активацию естественных киллеров и системы интерферона. Такой механизм в наибольшей степени соответствует современным представлениям о природе иммунных дисфункций, сопровождающих герпесвирусные инфекции [6]. В настоящее время опыт применения аллокина-альфа при лечении различных форм герпеса включает более тысячи пациентов. Таким образом, эффективность аллоферонов при терапии герпесвирусных инфекций можно считать установленной в соответствии с критериями доказательной медицины.

Для лечения вирусных инфекций кожи и слизистых оболочек недавно разработан новый препарат из этой группы — Алломедин. Основным действующим компонентом Алломедина является синтетический пептид аллоферон-3, представитель семейства аллоферонов с улучшенными характеристиками биологической активности. Терапевтическое действие аллоферона-3, как и других аллоферонов, направлено на усиление распознавания вирусных антигенов иммунокомпетентными клетками и уничтожение очагов вирусной инфекции [7]. В частности, в присутствии аллоферона-3 значительно усиливаются способность естественных киллеров распознавать и лизировать аномальные клетки, а также продукция интерферона лейкоцитами в ответ на стимуляцию вирусным антигеном. В том и другом случае аллоферон-3 выступает в качестве кофактора активации иммунного ответа, для формирования которого необходимо участие основного сигнала – патологически измененной клетки или вирусного антигена. Эта особенность позволяет локализовать действие препарата в очаге поражения, избегая избыточных реакций иммунной системы за его пределами, характерных для других иммунотропных лекарственных средств.

Аллофероны, наряду с антивирусной активностью, обладают противоопухолевым действием, впервые обнаруженным в опытах на животных с трансплантированными опухолями [3]. Сравнительные исследования аллоферона-1 и аллоферона-3 показали, что последний обладает более выраженными адъювантными свойствами, обеспечивая эффективное распознавание опухолевых антигенов и отторжение опухолевого трансплантата [8]. Возможность направленного усиления противоопухолевого иммунитета представляет особый интерес в случае папилломавирусных инфекций, главная опасность которых состоит в вероятности ракового перерождения зараженных вирусом клеток эпителия.

Область применения Алломедина как дерматологического средства связана главным образом с лечением герпесвирусных и папилломавирусных инфекций кожи и слизистых оболочек. Поскольку терапевтическая эффективность аллоферона-1 в отношении герпеса надежно доказана предыдущими клиническими исследованиями, а антивирусные свойства аллоферона-3 сходны с таковыми аллоферона-1, мы считали первоочередной задачей исследование эффективности препарата в отношении папилломавирусных инфекций. Основную группу исследования составляли пациентки Центра превентивной медицины с папилломавирусными инфекциями шейки матки (58 человек). У всех пациенток непосредственно перед началом лечения методом ПЦР установлено наличие в эпителии шейки матки онкогенных 16 и 18 типов ВПЧ. Курс лечения Алломедином проводился в режиме монотерапии (8 человек, ежедневные аппликации геля на папилломатозные очаги один раз в день на протяжении 3 дней) или в сочетании с инъекциями аллокина-альфа (50 человек, три подкожные инъекции на физиологическом растворе ежедневно, затем ежедневные аппликации геля на папилломатозные очаги один раз в день на протяжении 1—3 дней). Повторный анализ на ВПЧ 16/18 типов не выявил наличие этих вирусов ни у одного больного, получавшего Алломедин в режиме монотерапии (эффективность 100 %). В группе больных, получавших Алломедин в сочетании с Аллокином-альфа, вирус не выявлялся у 47 из 50 человек (эффективность 94 %).

Аналогичные результаты дало пилотное исследование, проведенное в Центре клинической иммунологии на 5 больных с подтвержденным диагнозом папилломавирусной инфекции шейки матки. Диагностика осуществлялась с использованием расширенной кольпоскопии, патоморфологического исследования биоптатов и типирования вируса методом ПЦР, при котором у всех пациенток были выявлены онкогенные типы ВПЧ (16, 18, 31 и 32). Эффективность лечения оценивалась через 6 недель с применением расширенной кольпоскопии и ПЦР-типирования. При ПЦР-обследовании женщин, получавших Алломедин в сочетании с инъекциями Аллокина-альфа, ВПЧ не был выявлен ни в одном случае. В этом же исследовании гель “Алломедин” использовался в качестве монотерапии для лечения плоских бородавок на коже и недавно образовавшихся папиллом у 4 больных. Гель наносили на кожу 2–3 раза в день в течение 7–10 дней. У всех больных отмечено рассасывание (вплоть до исчезновения) папиллом и бородавок, а также отсустствие появления новых элементов.

Суммарные данные этих двух исследований показывают, что эффективность Алломедина, применяемого в режиме монотерапии или в сочетании с Аллокином-альфа, превышает 95%. При этом лечение только Алломедином не уступало по эффективности комбинированной терапии Алломедином и Аллокином-альфа. Важно отметить, что все больные с инфекцией шейки матки были инфицированы ВПЧ высокого онкогенного риска. У большинства из них (60 из 63 человек) вирус, по данным ПЦР-анализа, после лечения не выявлялся.

В центре клинической иммунологии была также исследована эффективность монотерапии Алломедином при лечении орофациального герпеса (8 больных). Гель наносился на пораженный участок кожи 2–3 раза в день на протяжении 5 дней. Во всех случаях был достигнут очевидный терапевтический эффект: уже после первого применения исчезало ощущение зуда и жжения, вскоре после этого резко уменьшалась зона отека и гиперемии. Продолжительность рецидива в среднем сокращалась вдвое по сравнению с его продолжительностью до лечения Алломедином на фоне традиционных методов лечения. В целом результаты лечения рецидива Алломедином оказались сходными с терапевтическим эффектом Аллокина-альфа, инъекционной формы аллоферона-1. На этом основании можно ожидать, что терапевтический эффект Алломедина будет сопровождаться увеличением периода ремиссии, типичным для Аллокина-альфа [5].

Помимо высокой терапевтической эффективности для Алломедина характерно практически полное отсутствие побочных эффектов, не отмеченных ни у одного из 72 больных. Результаты клинических испытаний Аллокина-альфа показывают, что примерно у 3 % пациентов с рецидивирующим генитальным герпесом введение препарата вызывает появление дополнительных высыпаний [5]. Этот эффект, по-видимому, связан с усилением иммунологического распознавания участков скрытой вирусной инфекции и последующим развитием воспалительной реакции. Такая реакция может восприниматься как ухудшение состояния больного, однако в действительности она способствует элиминации очагов размножения вируса и достижению за счет этого более стойкого терапевтического эффекта. Среди больных орофациальным герпесом, получавших Алломедин в ходе настоящего исследования, появление дополнительных высыпаний не отмечалось, однако по аналогии с Аллокином-альфа возможность их появления у отдельных больных не исключена.

Таким образом, Алломедин отличается исключительно высокой терапевтической эффективностью в отношении вирусов простого герпеса и в особенности папилломы человека. Учитывая широкое распространение и многообразие клинических проявлений этих инфекций, Алломедин может использоваться в различных областях дерматологии и смежных дисциплин:

  • дерматологии (простой герпес, папилломы различной локализации);
  • дерматовенерологии, гинекологии, урологии (генитальный герпес, остроконечные кондиломы, внутриэпителиальные дисплазии слизистых оболочек вирусной этиологии);
  • косметологии (профилактика и лечение герпеса, папиллом на коже и слизистых, в том числе при косметологических процедурах и операциях);
  • стоматологии (герпетические стоматит, гингивит);
  • онкологии и профилактической медицине (профилактика рака шейки матки и других онкологических заболеваний кожи и слизистых).
Это интересно:  Впч вкр 31 типа

В перспективе применение Алломедина открывает возможности не только лечения вирусных инфекций, но и профилактики связанных с ними злокачественных новообразований. Дальнейшая работа в этом направлении, по нашему мнению, позволит значительно снизить заболеваемость и смертность от рака шейки матки и других вирусзависимых онкологических заболеваний, составляющих около 30% всех случаев рака.

Рекомендуем ознакомиться со следующими разделами:

Дендритная вакцина

Основа биовакцины – это материал опухолевого образования. Важно понимать, что использование вакцины на основе дендритных клеток является лишь частью комплексной терапии в лечении рака.

Дендритные клетки т.е. вакцину на их основе изготавливают после хирургического лечения с применением полученного в процессе вмешательства опухолевого материала, а также клеток, выделенных из крови больного.

После этого пациент продолжает основной курс терапии (химиотерапию или другое) и после его окончания несколько раз получает дендритную вакцину, при помощи которой удается закрепить полученный результат терапии. Это обеспечивает профилактику рецидива и развития метастазов.

До настоящего момента в мире было проведено более 1000 клинических испытаний биовакцин где применялись дендритные клетки. В этих испытаниях принимали участие больные с распространенными стадиями рака, и в результате был сделан вывод, что использование биовакцин должно быть направлено не только на борьбу с опухолью, но и на профилактику рецидивов и образования метастазов.

Роль дендритной вакцины в лечении рака сложно переоценить, ведь большинство летальных исходов при онкологических опухолях возникает в результате прогрессирования патологии и развития метастазов.

На сегодняшний день нами получены результаты клинических исследований, а изготовление дендритной вакцины проводится усовершенствованным методом, не имеющим аналогов во всем мире.

Роль дендритных клеток

Дендритные клетки являются важным звеном в формировании приобретенного иммунитета. Согласно данным медицинских исследований, количество дендритных клеток в организме пациента со злокачественными опухолями существенно снижено, а сами они функционируют неполноценно.

Считается, что снижение количества дендритных клеток и потеря эффективности их работы является одной из основных причин отсутствия полноценной иммунологической защиты организма на развивающийся раковый процесс.

Из этого можно сделать вывод, что даже при введении антигенов непосредственно в патологический очаг не наблюдается активизации иммунитета в нужном объеме. При культивировании дендритных клеток в условиях in vitro часто удается избежать отрицательного действия иммунносупрессивных факторов и обеспечить полноценное созревание этих клеток.

Дендритные клетки культивируют в среде, которая содержит материал опухоли. Для изготовления вакцины материал, взятый из опухоли, обрабатывается специальным образом, что позволяет повысить иммуногенность опухолевых антигенов.

Индивидуальное изготовление вакцины для каждого пациента

Биовакцины, изготовленные индивидуально для каждого отдельного пациента, на сегодняшний день являются самыми безопасными и высокоэффективными в лечении онкологических заболеваний. Благодаря проведенным исследованиям было установлено, что использование вакцин на основе дендритных клеток в составе комплексного лечения рака позволило существенно повысить продолжительность и качество жизни пациентов.

После введения вакцины в организм дендритные клетки перемещаются в лимфоидную ткань, где участвуют в обучении Т-лимфоцитов и инициируют их пролиферацию. Терапевтический эффект вакцины заключается в активизации цитотоксических Т-лимфоцитов, активность которых у онкологических больных существенно снижена.

— инновационная терапия;
— как получить квоту в онкоцентр;
— участие в экспериментальной терапии;
— помощь в срочной госпитализации.

Дендритные клетки – элитное оружие против рака

Недавно мы писали новость о первом успешном излечении рака молочной железы на терминальной стадии. Пациентку из США успешно вылечили с помощью перспективного метода лечения опухолевых заболеваний – иммунотерапии. В качестве противоопухолевых агентов были выбраны специфические иммунные тельца самой пациентки – дендритные клетки, о которых мы и поговорим.

Иммунотерапия рака – попасть точно в цель

Сложность и коварность злокачественных опухолей в том, что они невидимы для иммунной системы. Если в норме все атипичные клетки подлежат уничтожению, то при сбоях иммунной системы этого не происходит. Клетка, которая «неправильно» себя ведет, начинает размножаться и приобретать все признаки злокачественной. Так формируется опухоль, которая незаметна для иммунной системы, и в конечном итоге, приводящая к гибели больного, если вовремя не предпринять никаких мер.

Существенная проблема в лечении раковых заболеваний состоит в том, что существующие методы терапии приводят к серьезным побочным эффектам. Раковая клетка хоть и отличается от здоровой, но во многом обладает тем же набором признаков и функций. И если химиотерапия сильно бьет по раковым клеткам, то страдают и здоровые клетки тоже.

Долгое время ученые искали прицельные методы борьбы с раком, позволяющие им точно уничтожать раковые клетки, не поражая при этом здоровых. И, похоже, такой метод найден. Иммунотерапия – термин, который внедрился в онкологическую практику еще несколько десятков лет назад, однако сегодня к этому методу лечения приковано все медицинское и научное сообщество, ведь оно показывает феноменальные результаты.

Для проведения иммунотерапии в организм вводят специальные вещества – опухолевые антигены, которые в организме способствуют продукции специфических иммунных клеток, поражающих злокачественные клетки.

Преимуществом иммунотерапии является тот факт, что она высокоспецифична и работает только в отношении злокачественных клеток, не затрагивая здоровых.

Дендритные клетки – суровый «пограничный» контроль

Каким же образом происходит иммунный ответ на чужеродные агенты в организме, в том числе и раковые клетки? Среди множества клеток, принимающих участие в иммунном ответе, отдельно следует сказать о дендритных клетках. Это популяция особых клеток, имеющих отросчатые участки по периметру, которые задействованы в презентации чужеродных антигенов другим клеткам иммунной системы. Другими словами, дендритные клетки активируют адаптивный иммунитет.

Впервые дендритные клетки были открыты в 1868 году немецким ученым Паулем Лангергансом. Из-за специфической морфологии ученый ошибочно принял эти клетки за нервные окончания. И только в 1973 году ученому Ральфу Стайнману удалось установить принадлежность этих клеток именно к иммунной системе. В 2011 году ученого з это эпохальное открытие наградили Нобелевской премией, но посмертно. Как известно, Нобелевская премия посмертно не вручается, а Ральф Стайнман стал третьим ученым, которому Премию вручили уже после смерти.

Дендритные клетки являются антигенпрезентирующими клетками. Главным образом, располагаются они в крови и тканях, которые непосредственно контактируют с внешней средой. Уникальность этих клеток в том, что они обладают инструментарием, который позволяет им распознавать чужеродных агентов. Они способны поглощать чужеродных агентов, при этом они расщепляют антигены на отдельные части пептидов, которые затем связываются с молекулами главного комплекса гистосовместимости (MHC – Major Histocompatibility Complex). Таким образом, происходит вызревание дендритной клетки, после чего она презентует при помощи МНС вражеский антиген иным клеткам иммунитета. Это, например, Т-клетки, которые ранее еще не сталкивались с антигенов. После такой встречи Т-клетки начинают активно делиться и специализироваться в клетки-уничтожители чужеродных клеток или в эффекторные Т-клетки. Также имеются CD4+ T-клетки, которых называют Т-хелперами. Эти клетки стимулируют В-лимфоциты, производящие антитела. В свою очередь антитела, обладая высокой специфичностью к антигену, устремляются на его поражение.

Как дендритные клетки применяются в иммунотерапии

Как уже упоминалось выше, опухолевые клетки умеют обходить иммунологический надзор. В этой связи для прицельного их уничтожения иммунной системе крайне важно распознать антигены, находящиеся на поверхности опухолевых клеток. И в этом случае возникает закономерная задача – максимально эффективно уничтожить раковую опухоль с помощью клеток собственной иммунной системы.

Уже показано на животных, что дендритные клетки могут захватывать антигены опухолевых клеток и презентовать их Т-клеткам иммунной системы. Так возникает активация опухолеспецифических Т-лимфоцитов, что приводит к настоящей войне с раковой опухолью.

Отметим, что в нашем организме имеются и другие антигенпрезентирующие клетки, например, макрофаги. Однако дендритные клетки эту работу выполняют намного эффективнее, поэтому они и используются в настоящее время в иммунотерапии рака. Именно благодаря своим уникальным свойствам дендритные клетки были выбраны для экспериментальной терапии рака молочной железы терминальной стадии, которая закончилась успешно. Уже 2,5 года пациентка полностью здорова и рецидивов не наблюдается.

Как опухоли сражаются с дендритными клетками

Однако не все так просто, как нам бы того хотелось. Дендритные клетки обнаруживаются в большинстве опухолей. Они буквально пожирают части злокачественных клеток, пытаясь предоставить иммунной системе антигены. Однако опухоли в свою очередь умело этому препятствуют. Например, опухоли активно продуцируют раково-эмбриональный антиген и муцин-1, которые не позволяют дендритным клеткам презентовать опухолевые антигены Т-клеткам.

Кроме того, опухолевые клетки мешают нормальному созреванию дендритных клеток. Опухоли продуцируют специфический белок IL-10, в присутствии которого невозможна антигенспецифическая реакция. Также опухолевые клетки высвобождают коктейль веществ, которые способствуют образование других дендритных клеток, обладающих не противоопухолевыми свойствами, а наоборот – проопухолевыми! Одна из задач иммунотерапии – «перевоспитать» проопухолевые дендритные клетки в противоопухолевые, и сегодня для этого имеются соответствующие инструменты.

Вакцины на основании дендритных клеток

Вакцины против рака создаются для каждого пациента в индивидуальном порядке из его собственных дендритных клеток. Для начала секвенируется геном опухолевых клеток, то есть читается ДНК опухоли. Затем определяются мутации, и сегодня это не проблема в любой лаборатории, где имеются специальное оборудование. А далее, чтобы понять, какие именно из этих мутаций могут привести к образованию новых антигенов, создается библиотека соответствующих мутантных пептидов. Затем каждый из пептидов презентуется дендритным клеткам, отобранным заранее у пациента. Те дендритные клетки, которые реагируют на новые антигены, отбирают и размножают в лабораторных условиях, ведь именно они будут уничтожать опухолевые клетки (но в организме этого не происходит, поскольку таких клеток слишком мало).

Это интересно:  Впч 53 типа у женщин лечение

Затем в течение определенного периода (как правило, 1-2 недель) пациенту вводят новые клетки, а после чего – следят за его состоянием здоровья. К слову, у пациентки, которой удалось полностью вылечить рак молочной железы, биопсия не показала наличия опухолевых клеток уже через 42 недели после инъекции 90 миллиардов переобученных лимфоцитов. То есть этим клеткам понадобилось меньше года для того, чтобы уничтожить не только первичную опухоль, но и метастазы в организме больного. Примечательно, что пациентке давали всего 2-3 месяца, но спустя 2,5 года все анализы «чистые».

Вакцинация дендритными клетками для лечения рака в Германии. Борьба с раком – нетоксичный подход к лечению

Вакцинация дендритными клетками для лечения рака в Германии. Борьба с раком – нетоксичный подход к лечению.

Исследования показали, что новые и жизнеспособные дендритные клетки можно вводить в организм в виде вакцины. Если там существует рак, то прививка дендритными клетками обращает внимание иммунной системы на его присутствие и возобновляет работу соответствующих функций.

Это служит средством мобилизации особой силы иммунной системы, способной находить рак и бороться с ним. Эти дендритные клетки получают из лейкоцитов собственной крови пациентов (поэтому они являются «аутогенными»).

Первоочередная задача клеточного иммунитета заблаговременно обнаруживать и уничтожать клетки рака. Нужно понимать, что у каждого человека в организме каждый день образуются тысячи клеток рака. До тех пор, пока иммунная система будет способна распознавать их заранее, и контролировать вновь появляющиеся раковые клетки, человек никогда не заболеет клиническим раком, даже в течение всей жизни.

У пациентов с развитыми злокачественными болезнями, наблюдается общий иммунодефицит 1.

Когда появляется рак, иммунная система, по определению, ослаблена или организм был подвержен интенсивному воздействию канцерогенов. Ослабленные иммунные функции часто сопровождаются падением их числа и/или способностью иммунных клеток эффективно распознавать или уничтожать клетки рака.

Дендритные клетки – это одно из главных условий эффективной реакции иммунитета на клетки рака. Дендритные клетки циркулируют по тканям организма, проверяя их на наличие аномальных клеток. Дендритные клетки также нацелены на потенциально злокачественные клети из-за хронической инфекции вируса (например, хроническая вирусная инфекция в шейке матки, такая как вирус бородавки человека, которая может превратиться в злокачественную).

Когда аномальная клетка, например клетка рака, обнаружена, дендритные клетки направляются к ближайшему лимфатическому узлу и передают ему «идентификационный номер» раковой клетки, которую необходимо уничтожить. Если иммунная система больше не может распознавать клетки рака, она не способна уничтожать злокачественные клетки, по мере того, как они появляются изо дня в день. Когда это происходит, рак приобретает опору и беспрепятственно увеличивается.

Клетки опухоли, которые могут годами оставаться неопознанными, относятся к субклиническому раку. Через некоторое время, опухоль может начать развиваться, не будучи обнаруженной, и накапливаться.

За последние 10 лет, в Центре прошли терапию дендритными клетками около 4200 пациентов. В Медицинском Центре Кёльн были успешно вылечены такие состояния заболевания раком, как – первичная и вторичная опухоль головного мозга, первичный рак костей и метастазы в костях, рак груди, рак поджелудочной железы и толстой кишки, все виды метастазов печени, холангиоцеллюлярный рак, рак легких, меланома и рак предстательной железы.

Как это происходит :

Сначала, после простого взятия пробы крови, ее отправляют в высокотехнологическую медицинскую лабораторию, где специально обученные микробиологи и технические специалисты выделяют из крови определенные белые кровяные тельца (моноциты). Затем, в течение семи дней, они выращивают и трансформируют эти клетки в новое поколение дендритных клеток. Это новое поколение жизнеспособных, активизированных дендритных клеток вводятся в организм пациенты путем простейшей внутрикожной инъекции.

» После того, как мне сделали операцию на легкие, чтобы удалить некоторые придаточные опухоли, мы принесли вещество из второго легкого в Кёльн, потому что в нем содержались активные клетки опухоли. Эту ткань использовали, чтобы создать дендритные клетки.»>Когда я начал проходить лечение в Медицинском Центре Кёльн, док. Гортер оценил мое состояние и предложил двухнедельный курс вакцинации вирусом ньюкаслской болезни. Прежде чем началось лечение, у меня взяли образцы крови. Мне давали вакцину каждый день, оставляя один выходной. В первую неделю ее вводили внутривенно. После этого мне делали инъекции, а также давали ее в виде распыляемого раствора, который я вдыхал. Мы ездили в Кёльн каждый день и забирали вакцину для следующего дня домой, где мне помогала ее вводить медсестра в нашем городе.

Это интересно:  Лечение бородавок на пальцах рук

Дендритные клетки я получал раз в месяц. Первая вакцинация была через восемь дней после серии вакцинаций вирусом ньюкаслской болезни, также состоящей из восьми дней. Вирус едва ли давал какие-то побочные эффекты – я немного дрожал, и у меня была температура, но не так сильно, как при клеточной терапии, уже через пол — часа после которой, я должен был лечь в постель. Лечение помогало и через девять месяцев сканирование показало, что рак печени был в состоянии ремиссии, а опухоли в легких были стабильными.

Я прекрасно себя чувствовал физически.Доктора в Роттердаме были поражены и они посчитали, что я в достаточно хорошей форме, чтобы сделать операцию и удалить опухоли в легких. Они обнаружили, что раковые клетки в первой легком полностью умерли (некроз). Под рентгеновскими лучами было не заметно, что у меня когда-то была опухоль. Мы были так счастливы. Во втором легком все еще находились активные клетки опухоли, хотя большая часть опухоли также подверглась некрозу. Но края вокруг того места, где делали операцию были чистыми, а также чистыми были и лимфатические узлы – и в моем другом легком и в моей печени больше не было активных раковых клеток. Вим Куустербоер, пять лет назад пережил гепатит В и вирус гепатита В, сопровождавшийся первичным раком печени с метастазами в лимфе, печени и легких.»

Вим Куустербоер, пять лет назад пережил гепатит В и вирус гепатита В, сопровождавшийся первичным раком печени с метастазами в лимфе, печени и легких.

Дендритные клетки в лечении впч

Разработка методов лечения злокачественных опухолей с помощью клеточных технологий, в частности иммунотерапии, является одним из приоритетных направлений в онкологии. В настоящее время в мире ведется более 300 клинических испытаний по использованию вакцин на основе стволовых и дендритных клеток для лечения онкологических заболеваний, из которых 232 в США и только 3 в России (согласно данным U.S. National Institutes of Health (clinicaltrials.gov). В НИИ клинической иммунологии СО РАМН (Новосибирск) разработаны и готовы к клиническим испытаниям специфические вакцины на основе активированных дендритных клеток, сенсибилизированных опухолевыми антигенами, против рака молочной железы, колоректального рака, рака простаты и яичника [1]. В НИИ онкологии им. Н.Н Петрова (С-Петербург) ведутся исследования по разработке и применению вакцин для иммунотерапии меланомы [2]. Оптимизация технологиии и стандартизация получения противоопухолевых вакцин на основе аутологичных дендритных клеток, диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук. Применение клеточных технологий для иммунотерапии онкологических заболеваний может способствовать преодолению резистентности опухоли к химиотерапии и повышению эффективности лечения больных [4, 5, 6].

Среди современных направлений в области вакцинотерапии злокачественных опухолей следует отметить расширение нозологических форм, подлежащих этому методу лечения, а также оптимизацию методов получения дендритноклеточных вакцин и протоколов их применения. Представляется значительной вероятность того, что рак шейки матки, в возникновении которого, как известно, велика роль вирусной инфекции, в частности ВПЧ высокого онкогенного риска, окажется чувствительным к иммунотерапии, например вакцинации дендритно-клеточными вакцинами.

Дендритные клетки (ДК) являются профессиональными антиген-представляющими клетками, участвующими в иммунном ответе благодаря своей способности активировать не только «наивные» CD4+ и CD8+ T-лимфоциты, но и Т-клетки памяти паракортикальных зон периферических лимфоидных органов. В связи с центральной ролью в формировании иммунных реакций изучение ДК является не только крайне важной фундаментальной, но и прикладной медико-биологической задачей. Имеющиеся в современной литературе данные свидетельствуют о значительном уменьшении количества ДК в опухолевой ткани, а также их функциональной неполноценности. В настоящее время разработаны методы получения дендритных клеток из CD34+ костномозговых миелоидных предшественников и моноцитов периферической крови.

Целью данной работы является отработка метода получения зрелых дендритных клеток из крови доноров и больных раком шейки матки для получения ДК-вакцины.

Материалы и методы исследования

Для получения фракции мононуклеарных клеток (МНК) периферической крови использовали ЭДТА-стабилизированную кровь 3-х здоровых женщин (доноров) и 3-х больных раком шейки матки (РШМ) в количестве 50 мл. Возраст доноров составлял 25, 34 и 65 лет; возраст больных 34, 36 и 39 лет.

Работу с клетками человека на всех этапах проводили в стандартных условиях стерильного модуля в ламинарно-потоковом шкафу II класса биологической защиты. Дендритные клетки получали из периферической крови с использованием стандартной процедуры [3]. В качестве ростовой среды использовали среду CellGroDC с добавлением 50 мкг/мл гентамицина, ростовых факторов и факторов дифференцировки GM-CSF (72 нг/мл) и IL-4 (20–45 нг/мл). На 3-й и 5-й день культивирования добавляли свежую порцию GM-CSF (72 нг/мл) и IL-4 (20–45 нг/мл). На 7-й день культивирования клетки из одного флакона использовали для анализа иммунофенотипа незрелых ДК на проточном цитометре. Во второй флакон добавляли ростовые факторы и факторы дифференцировки GM-CSF (72 нг/мл), IL-4 (20–45 нг/мл) и TNF-α (20 нг/мл), а также клеточный лизат культуры клеток HeLa в качестве антигенной нагрузки из расчета 3 клетки культуры HeLa на 1 дендритную клетку. Спустя 48 часов клетки снимали скрепером и после подсчета и анализа жизнеспособности в камере Горяева выполняли иммунофенотипирование зрелых ДК с помощью проточного цитометра путем выделения на графиках популяции МНК-ДК и очистки её от дебриса и лимфоцитов с помощью меток CD45, CD3, CD4, CD8, CD16+56, CD19. Оценка стадии созревания мононуклеаров производилась с помощью антител к CD1a, CD11c, CD14, CD33, CD38, CD83, CD86, HLA-DR.

Характеристика больных

Больная № 1 (34 года) 3 курса полихимиотерапии (ПХТ) в предоперационном периоде, курс дистанционной гамма-терапии (ДГТ). Операция: нервосберегающая экстирпация матки с придатками и верхней третью влагалища, тазовая лимфаденэктомия. Кровь взята в послеоперационном периоде.

Больная № 2 (36 лет) 2 курса ХТ в предоперационном периоде, курс иммунотерапии препаратом «аллокин-альфа». Операция: нервосберегающая экстирпация матки с придатками и верхней третью влагалища, тазовая лимфаденэктомия. Кровь взята в послеоперационном периоде.

Больная № 3 (39 лет) 2 курса ХТ в предоперационном периоде, курс иммунотерапии препаратом «аллокин-альфа». Кровь взята до операции.

Основными критериями отбора больных для настоящего исследования являлись степень распространения процесса, соответствующая по классификации TNM: T1в2N0-хM0, T2аN0-хM0, T2вN0-хM0 и репродуктивный возраст больных.

Критерием исключения служили: наличие метаболического синдрома; наличие отдаленных метастазов, выявленных до начала или в процессе лечения; отсутствие эффекта или прогрессирование заболевания после проведения 2 курсов неоадъювантной химиоиммунотерапии; наличие общих противопоказаний для проведения плазмафереза: критический уровень белка крови (ниже 50 г/л); наличие анемии III ст. (гемоглобин ниже 70 г/л); недренируемый очаг гнойного воспаления; инкурабельные состояния больных.

Результаты исследования и их обсуждение

При культивировании МНК крови отмечено, что уже через 3–4 часа начинается процесс прикрепления части моноцитов к субстрату подложки флакона. В процессе адгезии к подложке происходит увеличение размеров клеток, появление единичных отростков, распластывание по субстрату подложки. Через 3 суток становится заметно, что количество прикрепившихся к субстрату МНК здоровых доноров превышает количество МНК больных, что подтверждается и количественными данными, полученными при помощи камеры Горяева (1,5∙106/мл клеток больной и 2,5∙106/мл клеток здорового донора), (рис. 1, а, б). Через 7 сут культивирования в пробе больной присутствует 0,7∙106/мл, в донорской пробе 1,18∙106/мл клеток. Снижение их количества по мере культивирования представляется закономерным, поскольку происходит гибель и отмывание лимфоцитов, после чего на пластике остаются преимущественно ДК различной степени зрелости. На 7-е сутки эксперимента клетки, растущие на подложке флакона, в основном имеют многоугольную, отростчатую и веретеновидную формы (рис. 1, в, г).

На 9-е сутки культивирования дендритных клеток в присутствии GM-CSF, IL-4 и TNF-α, а также лизата культуры HeLa (рис. 2, а, б) отмечены различия между клетками больных и доноров. Характерная для ДК отростчатая или веретеновидная форма более выражена у донорских клеток; они более крупного размера, чем клетки больных.

МНК, 3 суток культивирования, GM-CSF (72 нг/мл) и IL-4 (20-45 нг/мл). Об. х10, ок. х10

Дендритные клетки, 7-е сутки культивирования. GM-CSF (72 нг/мл), IL-4 (20-45 нг/мл) и TNF-α (20 нг/мл, лизат культуры HeLa).Об. х10, ок. х20

Рис. 1. Количественные и структурные изменения МНК больных и доноров при культивировании в течение 7 дней: А – клетки больной; Б – клетки донора

ДК больной ДК донора

Рис. 2. Результаты заключительного этапа генерации ДК из МНК больных и доноров (9 суток культивирования, 48 часов инкубации с лизатом HeLa в присутствии факторов роста и дифференцировки). Об. х20, ок. х10

В таблице представлены результаты оценки эффективности генерации ДК из МНК 6 проб. Как видно из представленных данных, индивидуальная вариабельность результатов весьма значительна; пробы МНК различаются как по количеству выделенных, так и по проценту погибших клеток. У 2-х доноров количество ДК превышало этот показатель больных на 1–2 порядка.

Результаты эксперимента по генерации ДК из МНК доноров и больных РШМ

Статья написана по материалам сайтов: urolocus.ru, tumor-clinic.ru, www.likar.info, www.royalmedgroup.com, fundamental-research.ru.

»

Помогла статья? Оцените её
1 Star2 Stars3 Stars4 Stars5 Stars
Загрузка...
Добавить комментарий

Adblock detector